پیوندهای مفید
اخبار و اعلانات
آمار
| تعداد نشریات | 45 |
| تعداد شماره‌ها | 1,219 |
| تعداد مقالات | 10,473 |
| تعداد مشاهده مقاله | 20,218,619 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 13,907,619 |
بیان سازه دکامر لومازین سنتاز با منشأ بروسلایی در سیستم بیانی پروکاریوتی | ||
| فصلنامه علمی زیست شناسی جانوری تجربی | ||
| مقاله 7، دوره 9، شماره 1، شهریور 1399، صفحه 81-87 اصل مقاله (366.31 K) | ||
| نوع مقاله: مقاله پژوهشی | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.30473/eab.2019.47225.1725 | ||
| نویسندگان | ||
| بهجت مجیدی* 1؛ محسن فتحی نجفی2؛ شهریار سعیدیان3 | ||
| 1دکتری رشته بیوشیمی، گروه زیست‌شناسی، دانشگاه پیام نور، تهران، ایران | ||
| 2استادیار، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، مشهد | ||
| 3استادیار بیوشیمی، گروه زیست‌شناسی، دانشگاه پیام نور، تهران، ایران | ||
| چکیده | ||
| لومازین سنتاز بروسلایی، آنزیم دخیل در بیوسنتز ریبوفلاوین، مرکب از 10 زیرواحد مشابه می‌باشد که به‌صورت کپسیدی تجمع می یابند. با توجه به کاربردهای وسیع لومازین سنتازها در زمینه‌های بیولوژی، تولید لومازین سنتاز در مقیاس بالا و خالص‌سازی کارآمد آن ضروری می‌نماید. در مطالعه حاضر، ساختار اولیه لومازین سنتاز بروسلا ملی‌تنسیس از پایگاه داده NCBI دریافت گردید. توالی لومازین سنتاز ابتدا با استفاده از واکنش‌های زنجیره‌ای پلیمراز تکثیر گردید و سپس کلون و بیان گردید. بیان سازه با استفاده از پلازمید بیانی pET28a و در باکتری BL21 DE3 انجام گردید. برای حذف بقایای دیواره باکتری و خالص‌سازی پروتئین، از روش‌های رسوب‌دهی با آمونیوم سولفات و تکنیک‌های کروماتوگرافی تعویض یونی استفاده گردید. از آزمون‌های الیزا و وسترن بلات جهت تأیید بیان و مانیتورینگ مراحل استفاده گردید. خالص‌سازی لومازین سنتاز با استفاده از روش کروماتوگرافی با استفاده از سفادکس دی اتیل آمینو اتیل DEAE منجر به حصول باند یگانه در الکتروفورز با ژل پلی اکریلامید (SDS-PAGE) گردید. نتایج این بررسی نشان داد که روش‌های بهینه‌سازی بیان و خالص‌سازی مورد استفاده در این تحقیق، می‌تواند در تولید لومازین سنتاز نوترکیب بروسلایی خالص و در مقیاس بالا به‌عنوان یک محصول نوترکیب ارزشمند در تحقیقات واکسن استفاده گردد. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| بروسلا؛ بیان؛ خالص‌سازی؛ لومازین سنتاز؛ نوترکیب | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| Expression of a decameric lumazine synthase from Brucella spp. in prokaryotic expression system | ||
| نویسندگان [English] | ||
| Behjat Majidi1؛ Mohsen Fathi Najafi2؛ Shahriar Saeedian3 | ||
| 1Ph.D. of Biochemistry, Department of Biology, Payame-Noor University, Tehran, Iran | ||
| 2Assistant Professor, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Razi Vaccine and Serum Research Institute, Mashhad, Iran | ||
| 3Assistant Professor of Biochemistry, Department of Biology, Payam Noor University, Tehran, Iran | ||
| چکیده [English] | ||
| Brucella sp. Lumazine synthase, the enzyme involved in riboflavin biosynthesis composed of 10 identical subunits. According to extended applications of LS, it is necessary to set up a high yield expression and purification method for this enzyme.in current study, Lumazine synthase primary structure was achieved from NCBI database and it was expressed by pET28a in BL21 E. coli. The optimum concentrations of IPTG and Kanamycin was evaluated and applied for high yield expression of rBLS. For LPS removal and purification of protein, ammonium precipitation and ion exchange chromatography were performed and no background in ELISA (against Brucella) was observed. ELISA and Western Blotting techniques were applied for expression and purification confirming. For monitoring of purification, SDS-PAGE was applied. Purification of protein with DEAE sephadex (Diethylaminoethyl) resulted in a single band purified rBLS. The approach applied in this study can be used in generation a relatively pure rBLS as a valuable recombinant product in vaccine industries. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| Brucella, recombinant, Lumazine synthase, purification | ||
| مراجع | ||
|
Alvarez, P.; Zylberman, V.; Ghersi, G.; Boado, L.; Palacios, C.; Goldbaum, F.; Mattion, N.; (2013). Tandem repeats of the extracellular domain of Matrix 2 influenza protein exposed in Brucella lumazine synthase decameric carrier molecule induce protection in mice. Vaccine; 31(5): 806-812.
Baldi, P.; Velikovsky, C.; Braden, B.; Giambartolomei, G.; Fossati, C.; Goldbaum, F. (2000). Structural, functional and immunological studies on a polymeric bacterial protein. Brazilian Journal of Medical and Biological Research; 33(7): 741-747.
Liu, W., Sohn, H.W.; Tolar, P.; Pierce, S.K. (2010). It’s all about change: the antigen-driven initiation of B-cell receptor signaling. Cold Spring Harbor perspectives in biology; 2(7): a002295.
Mejias, M.P.; Ghersi, G.; Craig, P.O.; Panek, C.A.; Bentancor, L.V.; Baschkier, A.; Goldbaum, F.A.; Zylberman, V.; Palermo, M.S. (2013). Immunization with a chimera consisting of the B subunit of Shiga toxin type 2 and brucella lumazine synthase confers total protection against Shiga toxins in mice. Journal of Immunology; 191(5): 2403-2411.
Sambrook, J.; Fritsch, E.F.; Maniatis, T. (1989). Molecular cloning: a laboratory manual, Cold spring harbor laboratory press.
Sambrook, J.; Russell, D.W. (2006). Purification of nucleic acids by extraction with phenol: chloroform. Cold Spring Harbor Protocols; 2006(1): pdb. prot4455.
Sciutto, E.; Toledo, A.; Cruz, C.; Rosas, G.; Meneses, G.; Laplagne, D.; Ainciart, N.; Cervantes, J.; Fragoso, G.; Goldbaum, F.A. (2005). Brucella spp. lumazine synthase: a novel antigen delivery system. Vaccine 23(21): 2784-2790.
Velikovsky, C.A.; Cassataro, J.; Giambartolomei, G.H.; Goldbaum, F.A.; Estein, S.; Bowden, R.A.; Bruno, L.; Fossati, C.A.; Spitz, M. (2002). A DNA vaccine encoding lumazine synthase from Brucella abortus induces protective immunity in BALB/c mice. Infect Immun; 70(5): 2507-2511.
Wei, Y.; Kumar, P.; Wahome, N.; Mantis, N.J.; Middaugh, C.R. (2018). Biomedical Applications of Lumazine Synthase. J Pharm Sci.; 107(9): 2283-2296.
Zhang, X. (2005). Structural studies of lumazine synthases: Thermostability, catalytic mechanism and molecular assembly, Biovetenskaper och näringslära/Biosciences and Nutrition.
Zhang, X.; Konarev, P.V.; Petoukhov, M.V.; Svergun, D.I.; Xing, L.; Cheng, R.H.; Haase, I.; Fischer, M.; Bacher, A.; Ladenstein, R.; Meining, W. (2006). Multiple assembly states of lumazine synthase: a model relating catalytic function and molecular assembly. J Mol Biol.; 362(4): 753-770.
Zylberman, V.; Craig, P.O.; Klinke, S.; Braden, B.C.; Cauerhff, A.; Goldbaum, F.A. (2004). High order quaternary arrangement confers increased structural stability to Brucella sp. lumazine synthase. J Biol Chem.; 279(9): 8093-8101.
Zylberman, V., Klinke, S.; Haase, I.; Bacher, A.; Fischer, M.; Goldbaum, F.A. (2006). Evolution of vitamin B2 biosynthesis: 6, 7-dimethyl-8-ribityllumazine synthases of Brucella. Journal of bacteriology; 188(17): 6135-6142. | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 556 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 380 |
||